安徽工程大学学报

2016, v.31;No.101(04) 6-11

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易错PCR提高粘质沙雷氏菌磷脂酶A1活性
Improving the Activity of Phospholipase A1 from Serratia Marcescs PL-06 by Error-prone PCR

王玉满;薛正莲;王洲;苏燕南;朱昊;

摘要(Abstract):

利用易错PCR技术对来自粘质沙雷氏菌PL-06的磷脂酶A1基因plaB进行定向改造,通过引入不同浓度Mg~(2+)、Mn~(2+)得到的易错PCR产物与表达型质粒pET-28a(+)重组,构建磷脂酶A1突变文库,筛选出高酶活突变株EPB8.该突变酶相对野生酶酶活提高了22.5%,并对突变株EPB8产酶条件进行优化,优化后酶活较野生酶酶活提高41%.序列分析表明:plaB基因有11个碱基发生突变,导致7个氨基酸发生突变,其中磷脂酶A1蛋白有3个氨基酸突变,分别是Y~(97) C、P~(98)S、X~(228) L,辅助蛋白有4个氨基酸突变,分别是P~(46) L、Q~(58) L、N1~(36) D、H~(233) R.该实验结果为进一步在分子水平定向提高磷脂酶A1的活性奠定了基础,也为该酶在其他高表达系统中的表达提供了素材.

关键词(KeyWords): 粘质沙雷氏菌;磷脂酶A1;易错PCR;产酶条件优化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(31471615)

作者(Author): 王玉满;薛正莲;王洲;苏燕南;朱昊;

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参考文献(References):

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